海带无性繁殖系育苗技术

　　我国目前普遍采用夏苗培育法进行海带苗培育，其具有两大缺点：①育苗时间长、成本高、风险大。②由于育苗时混采、混育，易造成品种优良性状退化。目前一些海带育苗场开始采用无性繁殖系育苗技术，即利用海带配子体克隆进行海带苗培育，育苗50～60天幼苗即可出库下海，不仅节约近一半育苗成本，并且可保持海带良种性状不退化，产量高。现将育苗方法总结如下：

　　一、无性繁殖系培养

　　1.种海带准备挑选种海带的方法和程序同传统采苗方法基本相同，选择个体宽长、颜色深褐、富有光泽、健康的藻体，并且藻体上孢子囊无附着物、成熟度好。用剪刀剪下约5厘米×5厘米的孢子囊，用消毒棉花蘸煮沸后冷却海水，将附着在上面的污物拭净，然后用消毒海水冲洗数次，阴干后，放入10℃低温消毒海水中，使其放散游孢子。

　　2.孢子附着游孢子数目达到2～5个/160×*时将海带取出，用纱布过滤孢子水去除黏液后，将玻片放入。当孢子在玻片附着密度达到10个左右/160×时，取出玻片放入低温消毒海水中培养。培养条件：水温10～15℃;光照强度1500～2500米烛;光照时间每日24小时光照。培养液：煮沸冷却消毒海水，硝酸钠一氮：百万分之五，磷酸二氢钾一磷：百万分之一。培养液需定时更换，一般每周换水一次。

　　3.无性繁殖系初培养当配子体生长至可以区分雌雄时，用毛细管将雌、雄细胞单独取出，分别放入试管内进行培养，培养方法同上。随着雌雄配子体的快速生长，很快成为球形的丝状藻球。由于藻球内部细胞不能接受光照，因此影响了生长速度，当藻球生长至直径1～2毫米，可用消毒玻片将其压碎，转移至250毫升三角烧瓶内，不久后每个丝状细胞段又可重新长成藻球，可再次压碎使其快速生长。

　　4.无性繁殖系扩大培养

　　（1）培养容器：随着无性繁殖系重量增大，可将其转移至大的容器内培养。由于玻璃器皿易碎且普遍价格较高，可用矿泉水桶替代，轻便、耐用、实惠且培养效果好。但其透光率在50%左右，需按生长需要光强折算照射光强。

　　（2）细胞团打碎：扩大培养时，由于工作量较大，不宜继续采用手工压碎，可用组织粉碎机将细胞团打碎成细胞段，一般用时10～20秒即可。

　　（3）培养条件：随着培养量日渐增大，上层细胞会遮挡住培养光线，影响下层细胞的生长。为加快生长速度，减少生产成本，可向培养液中不间断充气，这样所有细胞团能够接受充足光照，同时由于细胞团周围的培养液是流动的，具有较好营养条件，可增加生长速度。随密度增大，光照强度可适当增加。

　　（4）日常管理：每周换水1～2次，生长状态不佳及浓度较大时增加换水次数。换水时提前1小时停止充气，待细胞团沉降瓶底，吸出上清液，加入新鲜培养液。显微镜检查生长状态不佳有附着物时，可将细胞团倒入300目网箱，用喷雾器反复冲洗，直到无附着物为止。为避免充气时培养液污染，每日需定时开紫外线灯管半小时对空气进行消毒。

　　二、采苗

　　1.细胞团分离

　　（1）一次分离：要达到一定出苗密度，每个育苗帘需雌性无性繁殖系3克，雄性无性繁殖系1.5克。根据育苗量将所需要的雌雄无性繁殖系混合一起，连同少量培养液置于组织粉碎仪内切割，切割时间10～20秒，切割细胞段长度约200微米，即每细胞段有10个左右细胞。

　　（2）短日照培养：将一次分离后的无性繁殖系重新置于培养瓶中充气悬浮培养，每日光照时间10小时。

　　（3）二次分离：第一次分离后10天左右细胞逐渐增大，色素加深，逐渐进入发育状态。此时可进行第二次分离。用组织粉碎仪再次粉碎切割，然后用500目筛绢过滤出粉碎至适当大小的细胞段用于下一步采苗，一般每细胞段有1～4个细胞。未滤出细胞段继续粉碎过滤，反复进行，直至全部达到采苗要求。

　　2.采苗方法

　　（1）附着基：采用常规生产中使用的棕绳苗帘，经常规处理后，系上1厘米×3厘米大小的500目筛绢，以备育苗前期日常检查使用。

　　（2）附着基处理：将准备好的苗帘洗刷、伸直、低温海水浸泡预冷，单层平面式整齐摆放于已加满低温水的池中。

　　（3）喷洒：将细胞液用低温海水稀释至50段/160×以下，用喷雾器均匀喷洒在摆好附着基的池子水面，使其自然均匀沉降于育苗帘的表面。

　　三、育苗

　　1.流水细胞段不具备主动附着的能力，容易从附着基上脱落，因此采苗后先采取静水培养，24小时后微流水（表层流速5厘米/秒以下），72小时之后正常流水（表层流速5～10厘米/秒）。这样细胞既能够正常生长发育又能够避免随水流大量流失。

　　2.洗刷幼苗普遍大小4～8列细胞时虽然已出现假根，但尚有部分配子体未转成孢子体，且部分孢子体处于1～2列细胞，假根不明显。若此时洗刷，配子体和小孢子体势必脱落。若孢子体长至1毫米时开始洗刷，由于部分幼苗没有得到及时清理，影响光照使茎部弱而逐渐脱落，并影响其它幼苗茎部的健壮。所以开始洗刷的最佳时机是孢子体生长至8～16列细胞，幼苗体长0.5毫米左右时，假根明显且附着牢固。此时开始洗刷既会减少配子体及幼孢子体不必要的脱落，又会促进幼苗的正常健康生长。

　　孢子体长到8～16列细胞时开始以0.5千克/平方厘米左右的较小压力洗刷，随着幼孢子体的生长及附着力的提高逐渐增加洗刷强度和次数。

　　3.温度采苗期间保持水温5～6℃，静水期间不超过15℃，流水期间7～8℃。

　　4.光照配子体至8列细胞前，高光3000米烛，平均光1700～1800米烛;8列细胞至0.3毫米，高光3300米烛，平均光1800～1900米烛;0.3～3毫米，高光3600米烛，平均光1900～2000米烛;3～5毫米，高光4000米烛，平均光2100～2200米烛;5～10毫米，高光4500米烛，平均光2200～2400米烛;10毫米以上，高光5000米烛以上。

　　5.新水量幼苗大小5毫米前，日补充新水1/3，幼苗大小5毫米后，日补充新水1/2。

　　6.营养盐幼苗大小5毫米前，硝酸钠-氮：百万分之三、磷酸二氢钾一磷：千万分之三、柠檬酸铁一铁：亿分之二;幼苗大小5毫米后，硝酸钠一氮：百万分之四、磷酸二氢钾一磷：千万分之四。

　　四、小结与讨论

　　与传统育苗方式比较，无性繁殖系育苗技术虽经多项技术处理，其采苗效果仍达不到孢子体采苗效果。但这并不意味育苗效果也达不到孢子体育苗效果。海带育苗生产潜力较大，对采苗质量的要求有一定余地，采苗后相应的技术措施是是至关重要的，可弥补采苗质量不足，在上述一系列技术措施的实施下，两种育苗方式的育苗效果无明显差别。