褶皱臂尾轮虫的培养方法

中国水产门户网报道轮虫（Rotifer）是一群微小的多细胞动物，种类繁多，广泛分布于淡水、半咸水和海 水水域中，是水中浮游生物的主要组成部分，和鱼类、甲壳类的重要的天然饵料生物，历来 受到人们的重视。人们对轮虫的生物学、人工培养和应用进行过许多的研究，其中以半咸水 种类—褶皱臂尾轮虫（以下简称轮虫）的研究最为深入，它具有生活力强、繁殖迅速、营养 丰富、大小适宜和容易培养等特点，可至少在60种海洋有鳍鱼类和18种甲壳动物幼体的培养 过程中应用。

    一、轮虫种的分离

　　培养轮虫首先需要有种轮虫，种轮虫可以由有关单位供应，也可以 自己分离。褶皱臂尾轮虫生活在半咸水和海水中，当水温达15℃以上，在海边高潮区的小水 洼、小水塘等小型静水体中，尤其水质较肥、浮游藻类繁生的水中，常生活着褶皱臂尾轮虫 。可用网目为120微米左右的浮游生物网（即一般捕捞浮游生物的粗网）在这些小水体中捞 取，最好是在清晨日出之前，轮虫向表层游动时捕捞效果更佳。先用网目为300微米的尼龙 网滤掉其中的小鱼、杂物，再集中于容器中放置数小时。利用轮虫对缺氧或恶劣环境抵抗力 强的特性，待桡足类及其他浮游生物等死亡沉于水底时，再用纱布或滤纸平放水面使浮在水 上层的轮虫粘附其上，取出纱布把轮虫冲洗入另备的容器中，即可得到较纯的轮虫。按此方 法再经2次～3次分离之后，可得到纯种轮虫。也可把采集的水样在解剖镜下检查，如发现褶 皱臂尾轮虫，即用微吸管吸出。为了避免混杂其他动物，可先把吸出的水放置在一个清洁的 凹玻片中过滤，经观察准确后再吸入试管或小三角烧瓶中培养。褶皱臂尾轮虫个体较大，很 容易用吸管分离。在分离过程中应测定轮虫原生活环境的盐度，培养轮虫用水的盐度应该与 原生活环境的盐度相近。因为褶皱臂尾轮虫对盐度的突然变化的耐力较低，待分离培养成功 后如需要改变培养盐分，必须经过逐渐驯化过程。

    二、轮虫休眠卵和孵化

　　轮虫种可以长期培养保存，也可以休眠卵的形式长期保藏。如 果采用后者，则在培养前首先必须把休眠卵孵化。
1.休眠卵孵化的环境条件

　　对在黑暗条件下保存的休眠卵来说，光照是结束休眠的必需 条件。休眠卵能在1.5‰～35‰的盐度范围孵化，但以15‰～20‰的盐度最适宜。在5℃～35 ℃的温度范围内，休眠卵都能孵化，但孵化的时间则随温度的不同而有明显的差异，最适宜 的孵化温度为20℃～25℃。同时，在孵化容器中加入少量扁藻或小球藻液，使水略呈很淡的 藻色，有利于孵化。

    2.休眠卵的孵化方法

　　为了避免敌害生物的危害，消除小型甲壳动物，休眠卵孵化及培 养仔虫的海水，需要用300目的筛绢网过滤，并加入淡水调节盐度至最适范围。可用各种玻 璃培养缸、小水族箱作为孵化容器，容器在使用前应清洗、消毒，再用过滤海水冲洗干净， 然后加入孵化用海水，再加入少量藻液，把少量轮虫休眠卵放入海水中孵化。休眠卵中混杂 有大量的藻渣，用量太多易引起水质变坏。孵化容器应放置在靠近窗口或有人工照明的位置 。孵化期间每天搅拌水体1次～2次。如果条件适宜，一般在3天～7天的时间内即可孵化。在 孵化缸内存在着大量死藻渣，水质不好，孵化后的仔虫应吸移到备用的培养容器中培养。

　　三、培养方式依培养条件的人为控制程度分为粗养和精养；依培养和收获的特点分为一次性培养、半连续培养和连续培养，还有大面积土池培养等。下面介绍两种常用的培养方式：半连续培养和大面积土池培养。

　　四、半连续培养半连续培养是目前培养轮虫常用的方式，以下介绍一种典型的以水泥池为培养容器的半连续培养方式。

　　1.培养池分为轮虫培养池和单胞藻饵料培养池两种，均为室外水泥池，两种池的容量大约以1∶2的比例配套使用。轮虫培养池的容量为30立方米或40平方米，池深1.4米（有效水深1.2米）。单胞藻培养池的容量为100立方米～200立方米。

　　2.培养单胞藻饵料把轮虫和单胞藻饵料培养池洗净，消毒，灌水，施肥，培养单胞藻饵料。

　　3.接种当藻类饵料繁殖达到较大浓度时，以每毫升水体接入轮虫种30个～50个的数量，把轮虫种接入轮虫培养池。

　　4.培养接种轮虫后，充气培养。轮虫除摄食池内单胞藻饵料外，还应投喂一些面包酵母，每天投喂量为每100万个轮虫投喂酵母1克～1.2克，分上、下午两次或多次投喂。先把酵母在桶中加水搅拌均匀后再泼入水中，如果是用活性干酵母，需用电动搅磨机把团粒状的酵母干加水搅打成分离的单个酵母细胞（在水中呈悬浮状态）再投喂。

　　5.采收培养4天～5天后，轮虫的密度超过100个／毫升时，每天采收水容量的20％～35％。收获时，可用网目小于100微米的筛绢网制成约40升容量的网箱，网箱高40厘米，外有一方木框支撑，网箱捆紧在木框架内，张开。把网箱连同木框架放在一个高为20厘米的大塑料盆中，用虹吸法把池水用管吸出，流入网箱内过滤。待网箱内轮虫密度大时，用塑料勺舀取作为饵料投喂或作为种轮虫继续培养。采收后立即从单胞藻饵料池抽取藻液入轮虫培养池补回采收的水量，并继续投喂酵母，充气培养，可每天采收一部分。由于轮虫培养池中的残饵、轮虫粪便等物质会随着培养天数的增加而增多，使水质逐渐恶化，因此每次培养时间一般能维持15天～25天，最多30天，然后全部采收，清池，开始新一轮的培养。

　　五、大面积土池培养我国的鱼、虾育苗场大都拥有一定量的土池，利用土池培养轮虫技术较易掌握，成本低，收获量大，轮虫质量好。

　　1.培养池培养池的选址，要求排灌水方便，在盐度较高的海域最好有淡水源，在必要时可调节海水盐度。培养池的大小和数量主要依育苗生产的需要决定。一般年产2亿尾中国对虾虾苗的育苗场，配4口～5口面积为1亩～2亩的轮虫培养池。如育苗数量大，也可以用面积为10亩～15亩的养虾池培养轮虫。池的底质以不渗漏的泥质或泥砂质为好，要求池底平整，围堤坚固，池的有效水深为1米～1.2米。可采用水泵动力提水，也可在闸门安装250目或300目密筛绢过滤网，涨潮时海水经过滤后进入池内。

　　2.清池　清池方法有两种：一种为干水清池，即把池水排干，在烈日下暴晒3天～5天，即可达到清池目的，如果认为有必要，可再用清池药液，部分或全部泼洒池底和池壁；另一种为带水清池，即培养池连同池水一起消毒，按水体量加入药物杀死敌害生物，池水没有浸泡到的池壁，则用清池药液泼洒消毒。常用的清池药物有以下几种：

　　（1）漂白粉　漂白粉的有效氯含量为25％～30％，贮存时间太长会失效，因此在使用前必须测定其有效氯含量。清池的漂白粉用量为60克／立方米，使用时先加少量水调成糊状，再加水稀释泼洒。漂白粉清池可杀死鱼类、甲壳动物、藻类和细菌。清池后药效维持3天～5天，然后消失。

　　（2）氨水　农用氨水含氯量为15％～17％，清池的氨水用量为250ppm，稀释后泼洒。氨水清池可杀死鱼类、甲壳动物及其他动物。清池后2天～3天药效消失。

　　（3）五氯酚钠　清池的五氯酚钠用量为2ppm～4ppm，用水溶解后均匀泼洒，可杀死鱼类、甲壳动物、螺类和水草。数小时后药效消失。

　　3.灌水　药效消失之后，即可灌水入池。灌入池中的海水，必须通过250目或300目的密筛绢网过滤，以清除敌害生物。池塘一次进水不宜过多，第一次进水约20厘米～30厘米，随后逐步增加。

　　4.施肥培养单胞藻饵料　灌水后即施肥培养单胞藻饵料。采用有机肥和无机肥混合使用的方法，可使轮虫培养池在相当长的时间内维持肥效，以供应藻类大量繁殖的营养需要。有机肥的种类很多，但以发酵鸡粪的效果较为理想。鸡粪必须发酵，尽量避免使用新鲜鸡粪。近些年，随着工厂化养鸡业的发展，一些单位将鸡粪筛选、，高温干燥后制成以鸡粪为主的鱼用饲料，如能使用这种鸡粪，效果更佳。一般每亩池施发酵鸡粪100公斤～150公斤为基肥。如果是鸡粪发酵饲料，施肥量可减少30％。施肥时，先将50％的鸡粪肥均匀撒于池内，其余50％堆在池溏四周，依靠雨水使肥分缓慢地流入池中或作日后追肥用。施好基肥后每亩再施2公斤尿素和0.5公斤过磷酸钙。

　　在清池过程中，除杀死轮虫的敌害生物之外，轮虫的饵料--单细胞藻类也被杀死。施肥培养单细胞藻类需要有藻种，有条件的可以接种人工培养的优良藻种（如海水小球藻、扁藻等）入池培养。但由于土池的面积大，需要藻种的数量很大，一般难以解决。因此，在土池培养轮虫多利用在纳入天然海水时带进来的各种藻类作为培养种。所以，就是带水清池的培养池也要纳入（或水泵提水）部分海区的新鲜海水，以解决培养的藻种问题。施肥培养单细胞饵料，一般经4天～7天藻类即可繁殖起来。当藻类数量太大，池水透明度低于20厘米时，可隔天加水5厘米～10厘米。当池水水位升高到50厘米时，即可接入轮虫种。在培养过程中，根据藻类生长情况，每隔5天～7天，以同样的量追化肥一次。

　　5.接种　轮虫的接种量，一般以0.5个／毫升～1个／毫升较为适宜。可以把经不断扩大培养的种轮虫或把轮虫繁殖已达高峰的培养池的轮虫，连池水带轮虫抽入池中接种。

　　6.维持藻类饵料的数量在适宜的范围　土池培养轮虫，一般是不投饵的，轮虫主要摄食施肥培养的藻类饵料。由于培养的藻类饵料的增殖有一定限度，轮虫的密度不能过高，否则培养的藻类饵料就会一下子被吃光，因缺乏饵料而导致轮虫的大量死亡。为了平衡两者的关系，一般控制轮虫的密度在5个／毫升～20个／毫升之间，每天将超出部分收获，另一方面通过施、追肥，维持藻类的增殖，以补充轮虫的消耗，使藻类饵料的增殖量和轮虫的消耗量基本保持平衡，培养才能正常进行。

　　7.采收　轮虫的采收可用200目筛绢做成拖网，沿池边拖曳采收；也可在池面上设一浮筏，其上安装一个用200目筛绢制成的网箱，用一个小型水泵，把池水抽入网箱过滤；还可利用褶皱臂尾轮虫趋光的特点，利用光诱，使轮虫大量聚集在光强处，轮虫集中的地方呈褐红色，可用水桶直接舀取。

　　六、轮虫休眠卵的采收和保藏　褶皱臂尾轮虫两性生殖产生的休眠卵，便于运输和贮存。人们习惯以休眠卵的形式贮藏、保存种轮虫，当需要时，取出孵化，即可获得轮虫种。目前，在生产中诱发两性生殖形成休眠卵的方法，是以高的种群密度和饥饿刺激相结合进行。即先以常规方法培养出轮虫，不采收，待轮虫数量达高峰时，突然停止投喂饵料，并停止充气，池中的饵料很快就会耗尽，即会出现两性生殖，产生大量休眠卵。其次，还可改变盐度或温度，促进轮虫产生休眠卵。把低温条件下培养的轮虫放到加温至29℃～30℃的培养液中，每两天反复操作一次，通过温度刺激，可以人为地促使轮虫产生大量休眠卵。

　　轮虫产生休眠卵后，可每隔两天取池底沉积物进行镜检，待休眠卵数量较大，而且不继续增多时，即可采收。首先，把上层池水用虹吸法吸出，吸至剩下10厘米左右的水深，然后把池底沉积搅起，连同池水排出，经300目以上的筛绢过滤，再用清洁海水反复冲洗，尽可能把藻渣除去。把休眠卵和部分藻渣的混合物稍加阴干，然后装瓶蜡封。也可不阴干，连水稍加浓缩装瓶，加盖。

　　装瓶封装的轮虫休眠卵，放在低于5℃的冷藏箱内保存，可保存1年～2年，有的休眠卵保存8年以上仍具有孵化能力，可见休眠卵能耐受恶劣环境的时间是相当长的。休眠卵也可以不吸出，保留在原培养容器或原池中保存。原池水不能排去，也不能更换新水。若需要再培养时，把原池水排掉大部分（注意保留底部休眠卵），换入新鲜海水，并加入少量藻液，池中的休眠卵即可孵化，从而获得大量种轮虫。但原池保存休眠卵，由于病、敌害生物的危害，存活率不高。