虹鳟长期暴露于VirkonS（衛康）中的慢性毒性作用

中国水产门户网报道      一、引言 
　　水产用VirkonS（衛康）是在对动物病原体包括细菌、病毒等非常有效的生物杀灭剂和消毒剂的基础上而研制的一种氧化性消毒剂。VirkonS（衛康）由AntecDupont公司生产，在美国和欧洲广泛用于食品加工厂及动物饲养设施的消毒；它还作为一种病毒杀灭剂，广泛用于生物安全程序以及动物和人类流行病的控制。
　　动物用VirkonS（衛康）作为一种猪舍喷雾剂，可以通过减少动物周围空气中感染性病毒粒子的浓度来降低病毒性疾病发生的几率。最近，试验证明：水产用VirkonS（衛康）对鱼类的病原体如传染性鲑贫血病毒（ISAV）和传染性胰腺坏死病毒（IPNV）也非常有效。
　　爱达荷州立大学水产养殖研究工作站的工作人员临床观察表明：在进水中持续维持浓度为2ppm或4ppm的水产用VirkonS（衛康）对人工养殖的鲑科鱼类群体没有可观察到的有害影响。而将水产用VirkonS（衛康）持续施入患急性传染性胰腺坏死症的鱼类的养殖水体中时，虽然临床感染的个体仍在死亡，但鱼群中发生新个体继续感染的情况终止了，据此推测其原因是水体中感染性的病毒粒子被VirkonS（衛康）清除了。
　　水产用VirkonS（衛康）与其说是一种治疗药品，不如说是一种传统地用于水体、空气或其它界面消毒的生物杀灭剂。因此，将之以低剂量、不致毒的浓度加入水体中，它就显示出消毒的作用，使水体中的病毒数量降低到致病以下水平。从总体上的消毒剂性质来看，似乎VirkonS（衛康）也会对细菌以及水体中其它病原体如寄生性病原体、真菌孢子等也有杀灭作用。
　　就对水体进行消毒从而控制精养鱼池严重疾病的暴发而产生的潜在利益，以及降低农场和排出水体的感染性水平来说，该产品在鱼类健康、环境及其它福利等方面有着非常可观的益处。然而，在此成为可能之前，必须证明：用这种方法控制水体中的微生物群，在为期一个月的时间内，该浓度水平的VirkonS（衛康）对鱼类没有伴随的慢性副作用；这一点是非常重要的。
　　因此，AntecDupont公司与爱达荷州立大学Hagerman鱼类养殖试验站的R.W.Hardy教授订立了一份研究合同，进行了一项为期12周的毒性试验。该试验涉及将初孵的以及开口摄食的虹鳟（Oncorhynchusmykiss）鱼苗饲养在标准化的条件下，并保持水体中的VirkonS（衛康）维持在连续剂量的能杀灭病毒的浓度水平。
　　在Inveresk国际公司进行的研究表明VirkonS（衛康）对大西洋鲑幼鱼的96小时LD50值为25ppm。因此，在有效消毒的浓度水平下，即2ppm和4ppm时，水产用VirkonS（衛康）被认为几乎是没有毒性的。尽管如此，本研究还是详细阐明了在上述浓度及6ppm和8ppm时的毒性作用。

　　二、材料和方法
　　1．鱼类养殖
　　将从初孵期（0.08g）的虹鳟（O.mykiss）鱼苗饲养在四种浓度水平的溶有VirkonS（衛康）的水体中，直至其平均体重达到120g，其生长、健康和存活状况用不加VirkonS（衛康）的饲养群体作对照。水产用VirkonS（衛康）由AntecDupont公司免费提供给爱达荷州立大学。一共设置五个试验组：1）0ppm，2）2.0ppm，3）4.0ppm，4）6.0ppm，5）8.0ppm。
　　各浓度水平的实验组均设置三个饲养池。初孵鱼苗每池放养500尾，体重到1g时减少到250尾，10g时每池100尾。饲养池用的是15个150L的玻璃纤维水槽。每池最初的水体流速为4L/分钟，水温为14.5℃；刚开始的流水不加VirkonS（衛康）；随着生长，提高流速到8L/分钟，最终流速为16L/分钟。光周期用时钟和日光灯来控制，白天14小时，晚上10小时。饲养池在必要时进行清洗，在称重时进行彻底的刷洗。每间隔21天对鱼体进行总体称重。死亡的个体每天清除，并作记录；即将死亡的个体也捞出，解剖，用福尔马林缓冲液固定，以备作病理评估。
　　以商品虹鳟饵料（Nelson&Sons公司生产）投喂，外观饱食即可。开始时每天投喂十次，至本研究的末期时，每天三次。投喂到外观饱食是为了扩大可能与试验处理相关的生长抑制作用。记录进食量，并且每间隔21天对每个饲养池的饲料转化率进行计算。本研究第100天后结束，平均鱼体重达到约120g。
　　2．统计学分析
　　所有的合适数据用方差分析（ANOVA）进行统计学显著性检验。显著性水平是P<0.05。将每个饲养池的平均值作为观察分析的单位。
　　3．水处理方法
　　用蠕动定量给药泵向饲养池分别加入四种浓度水平的水产用VirkonS（衛康）。最初加入时稀释50倍，通过给药泵以合适的速度供给，最终要达到在进水中的浓度分别是2ppm，4ppm，6ppm和8ppm。每种处理方式都有三个饲养池，并以三个不加VirkonS（衛康）的饲养池作对照。
　　4．取样
　　每间隔21天对鱼体进行称重。例行地在第50天和第100天时取样，进行组织学分析；而平时只在发现有死亡个体的饲养池中取样。例行取样每次6尾，固定，对所有器官进行检查。

　　三、结果
　　结果显示，在未开食的鱼苗期，鱼体完全可以耐受2ppm的VirkonS（衛康）。而在4ppm、6ppm和8ppm饲养池中，虽然偶有鱼苗死亡，但其死亡与VirkonS（衛康）的剂量是无关的，因为这种情况也见于对照组中。然而，在开口摄食期，当卵黄物质90％被消耗时，8ppm试验组的死鱼损失迅速上升，并且在两周内这些鱼苗全部死亡。而6ppm试验组有50％个体死亡。重复进行这一特殊阶段的试验，每组仍是三个重复饲养池，结果相似。因此，在开口摄食期，水产用VirkonS（衛康）对虹鳟鱼苗的LD50值约为6ppm。
　　一旦这一关键的大约14天的开口摄食期结束后，所有剂量组、所有重复饲养池的鱼苗的临床表现和死亡现象与对照组相比均没有可观察到的差别。2ppm和4ppm试验组的鱼苗在整个后续的试验中的死亡率非常低。
　　任何经VirkonS（衛康）处理的饲养池的鱼苗在初期的生长速度均慢于对照组，但是到两个月之末时，其平均体重赶上了对照组。此后，所有试验组的饲养情况均优于对照组，其中以4ppm试验组为最好。
　　除开口摄食期外，各试验组鱼苗的组织学特征与对照组均是可比较的。在开口摄食期，2ppm试验组的鱼苗与对照组没有区别。而在4ppm、6ppm和8ppm试验组相应增强地出现了严重的鳃表面上皮细胞的肿胀，这一现象在6ppm和8ppm试验组是显著的。鳃组织还表现出特征性的粉红色泌盐上皮细胞的数量的增多，这可能是由VirkonS（衛康）引起的循环反应过程所导致的氯化钠释放的结果。
　　其它器官表现正常。因此可以假定，在这个特别的早期阶段，高浓度水平的水产用VirkonS（衛康）可导致对鳃的毒性作用；而8ppm的VirkonS（衛康）对所有鱼苗都是致命的。然而，这种对VirkonS（衛康）的敏感是过渡性的，比如，4ppm试验组的所有鱼苗以及6ppm试验组50％的鱼苗都能安全度过这一时期（重复试验过）；而从此以后，4ppm试验组的生长情况优于包括对照组在内的所有其它试验组，尽管试验组鱼苗的鳃小瓣较之于对照组而略微肿胀。
　　4ppm试验组与对照组相比而生长加快的原因尚不明确。开口摄食期以后，各试验组鱼苗的死亡现象与对照组相比均没有区别。任何重复饲养池之间的FCR（饲料转化率）没有统计学上的显著性差异，所以，4ppm试验组在统计学上显著性的生长加快也许是与其三个饲养池较高的饲料消耗量有关，而不是饲料转化效率增强的原因。