几种草鱼出血病的诊断技术

中国水产门户网报道草鱼出血病是在草鱼鱼种养殖阶段，由草鱼呼肠孤病毒引起的、危害最严重的一种疾病。此病的流行季节：5-9月主要危害草鱼种，5-7月主要危害2龄草鱼种，8-9月主要危害当年草鱼种。草鱼被病毒感染后可有三种不同的病症表现：
①红肌肉型：症状为肌肉充血呈红色，鳃往往因贫血而显得苍白，多见于7-10厘米。②红鳍红鳃盖型：症状为鳍条、鳍基、鳃盖及鳃瓣充血，常伴有口腔充血，严重时眼球突出，出现竖鳞，此症状多发在较大的鱼上(13厘米以上)。③肠炎型：症状以肠道严重充血为主要特征，多伴有肠内无食，肠系膜及膘、胆、肝、脾、肾点状或丝状充血，严重时全肠发紫，这种类型大小草鱼均可发生。这3种症状可单独发生，也可同时出现。
1.根据症状及流行情况进行初步诊断 
进行初步诊断时，必须注意以下区别：
(1)以肠出血为主的草鱼出血病和细菌性肠炎病的区别
活检时，前者的肠壁弹性较好，肠腔内黏液较少；病情严重时，肠腔内有大量红细胞及成片脱落的上皮细胞。而后者的肠壁弹性较差，肠腔内黏液较多；病情严重时，肠腔内有大量黏液和坏死脱落的上皮细胞，红细胞较少。
(2)草鱼出血病和细菌性败血症的区别  
 前者主要危害草鱼、青鱼的鱼种；后者则危害团头鲂、鲫、鲢、鳙、鳜、加州鲈、黄鳝、草鱼、大口鲇等多种淡水鱼，且对鱼种，食用鱼均有危害。
2.根据病理变化可做出进一步诊断  
如患出血病的鱼，小血管壁广泛受损，形成微血栓，同时引起脏器组织梗死样病变；在肝细胞等的胞浆内可以看到嗜酸性包涵体；超薄切片用透射电镜观察，在胞浆内可以看到球形病毒颗粒；血液中红细胞数、血红蛋白量及白细胞数均非常显著地低于健康鱼；白细胞血式小，淋巴细胞百分率十分显著地低于健康鱼，单核细胞百分率则非常显著地高于健康鱼；血清谷丙转氨酶、异柠檬酸脱氢酶、乳酸脱氢酶活性增高；血浆总蛋白、血清白蛋白、尿素氮、胆固醇均降低等。
3.免疫学诊断  
最后确诊需进行免疫学诊断，常用的免疫学诊断方法有：
(1)葡萄球菌A蛋白协同凝集试验 
该方法快速、特异、设备简单，适合基层单位检测。
(2)酶联免疫吸附试验(ELISA法)  
该方法灵敏、准确、特异，可用于早期诊断。中国科学院武汉病毒研究所已制成试剂盒，可供早期诊断用。
(3)斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)  
简称点酶法。该方法操作简便，不需要特殊的酶标仪；灵敏度高，比葡萄球菌A蛋白协同凝集试验的灵敏度高10倍，比常规酶联免疫吸附试验高20倍。在鱼已带毒，但尚未显症时即可检出。可用于早期诊断、检疫和病毒疫苗质量检定，是适合基层单位的快速、准确和易行的检测方法。
4.分子生物学诊断：逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)  
   该方法是检测草鱼出血病灵敏、特异、快速而有效的方法，更适合于大批样本的检测。该法不仅能够检测发病期显症病鱼体内的病毒，而且能够检测发病前期及发病后期外表正常的病毒携带鱼中的病毒，但其成本及设备要求较高，不太适合基层单位应用。